....1 sequencing primer (5’ CAA GGC TGT TAG AGA GAT AAT TGG A 3’). TIP: You may need to adjust the sequencing... Reverse oligo: 5’ AATTCAAAAA AATGCCTACGTTAAGCTATAC CTCGAG GTATAGCTTAACGTAGGCATT 3’ Back ...antisense—TTTTTG 3’ Reverse oligo: 5’ AATTCAAAAA—21bp sense—CTCGAG—21bp antisense 3’ For example...would be: Forward oligo: 5’ CCGG AATGCCTACGTTAAGCTATAC CTCGAG GTATAGCTTAACGTAGGCATT TTTTTG 3’ Reverse...

...oligo: 5' - AATTC CATATG TTAATTAA GGCGCGCC CAATTG G - 3' Bottom oligo: 3' - G GTATAC AATTAATT CCGCGCGG GTTAAC...oligo: 5' - CATATG TTAATTAA GGCGCGCC CAATTG - 3' = 28 bp Bottom oligo: 3' - GTATAC AATTAATT CCGCGCGG GTTAAC...tandem ( NdeI - CATATG , PacI - TTAATTAA , AscI - GGCGCGCC , MfeI - CAATTG ). The bottom oligo will be the...' - AATTCCATATGTTAATTAAGGCGCGCCCAATTGG - 3' Bottom oligo: 5' - TCGACCAATTGGGCGCGCCTTAATTAACATATGG - 3'...and SalI (see diagram ). To do this, we add 5' - AATTC and G - 3' to the top oligo and 3' - G and CAGCT...

...site (GAATTC) to the 5’ end of this primer, making our Forward Primer 5'-GAATTCATGTGGCATATCTCGAAGTAC-3'....final Forward Primer sequence of 5'-TAAGCAGAATTCATGTGGCATATCTCGAAGTAC-3'. For the Reverse Primer, the design...

...primer: tgtgccttggaatgctagt probe (FAM): tttggaatcacacgacct reverse primer: aatttctctgtcccactccatc PrimePCR...